一、HEI-OC1細胞來源

HEI-OC1細胞是一種由美國國家生物技術信息中心（NCBI）創建的內耳研究細胞系。該細胞系源自一位成年女性的耳蝸組織，經過原代培養和傳代，形成了具有穩定生長特性的細胞系。

二、培養基和添加物

1. 培養基：建議使用DMEM/F12培養基，該培養基含有多種氨基酸、維生素和生長因子，能夠支持HEI-OC1細胞的生長。

2. 添加物：為了維持細胞的健康生長，需要添加適量的生長因子和抗生素。例如，轉鐵蛋白、胰島素、地塞米松和青霉素等。

三、培養條件

1. 溫度：適宜的培養溫度為37℃，在此溫度下細胞能夠正常生長。

2. 濕度：維持培養基濕度在95%左右，以保證細胞的正常生長。

3. 氣體環境：使用5% CO2和95%空氣的培養箱，以維持培養基的pH值。

四、傳代和凍存

1. 傳代：當HEI-OC1細胞生長到80%-90%匯合度時，可以使用胰蛋白酶進行傳代。將細胞從培養瓶中取出，用胰蛋白酶消化后進行離心，再加入新鮮的培養基進行接種。

2. 凍存：為了長期保存HEI-OC1細胞，可以采用凍存技術。將細胞接種到凍存管中，加入適量的保護劑（如二甲基亞砜），然后置于-80℃冰箱中冷凍保存。

五、HEI-OC1細胞培養方法

培養基配制：

使用DMEM/F12培養基，添加10%胎牛血清（FBS），1% L-谷氨酰胺和1%青霉素/鏈霉素（或抗生素）。根據需要可添加其他的生長因子或化合物。

1. 培養皿處理：

使用70%酒精或其它消毒液對培養皿進行消毒處理。將消毒液均勻涂抹于培養皿表面并靜置片刻，然后將液體倒掉，培養皿繼續放置在無菌通風柜中。在培養皿上均勻涂抹培養基并使其整個表面均勻分布，接下來置于37℃的培養箱中至少30分鐘，確保培養皿內的溫度均勻。

2. 細胞解凍和接種：

將HEI-OC1細胞迅速從液氮中取出，立即放到37℃預熱的水浴中，快速震蕩使其解凍，然后立即將細胞離心并重新懸浮于預先加熱的培養基中。計算細胞濃度，并按所需細胞數接種到培養皿中。細胞接種后放置在37℃的恒溫培養箱中。

3. 細胞傳代：

一般情況下，當細胞密度達到80-90%時需要傳代。傳代的時間不宜過長，否則細胞易失去生長特性。以下是HEI-OC1細胞的傳代步驟：

   a. 倒掉培養皿中的舊培養基，用PBS或無菌的生理鹽水洗滌細胞。

   b. 加入一定體積的胰酶/EDTA溶液（如0.05% trypsin/EDTA），對細胞進行消化。消化時間一般不超過5分鐘，觀察細胞的形態變化，當細胞間出現較大的縫隙時即表示消化完成。

   c. 停止消化，加入相應體積的培養基中和胎牛血清，輕輕拍打培養皿使細胞充分懸浮。

   d. 計算細胞濃度，并按所需細胞數接種到新的培養皿中。

   e. 培養皿放置于培養箱中，在37℃下培養。

五、細胞培養注意事項：

- HEI-OC1細胞對培養基的組分和濃度比較敏感，建議使用DMEM/F12培養基，添加10%胎牛血清（FBS）等。

- 細胞密度過高可能會影響細胞生長和附著性，需要根據細胞的特點和實驗的需求調整細胞密度。

- 細胞的傳代時間要合適，不能過長，否則細胞易失去生長特性，建議根據細胞生長情況和實驗需求進行傳代。

- 注意細菌、真菌污染的預防，進行細胞培養時保持無菌操作。

HEI-OC1細胞培養常見問題：

問：復蘇了好幾次課題組之前凍存的HEI-OC1細胞，每次都是要么染菌要么傳代后大量漂浮，有時候還會出現不生長的現象，沒有培養超過五代的，大概是什么原因？

答：對于你提到的問題，可能有以下幾個原因導致這種現象的出現：

1. 培養皿處理不充分：培養皿表面不干凈或沒有充分消毒，這可能導致細胞附著不良或細菌污染。

2. 細胞密度過高：細胞密度過高會導致細胞互相附著，并形成團塊，難以正常生長和分裂。

3. 培養基成分不合適：不同批次的胎牛血清會有差異，可能會影響細胞的生長和附著性。

建議你在進行細胞培養時注意以上問題的排除。如果仍然存在問題，建議咨詢細胞培養專家或經驗豐富的研究人員，以獲取更具體的解決方案。

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